反相色譜柱使用維護(hù)事項的分享

液相色譜柱按照其色譜分離模式來分，大致可分為正相、反相、離子交換、疏水作用、體積排除、親和以及手性等類型。其中反相色譜柱是以鍵合非極性基團(tuán)的載體為填充劑填充而成的色譜柱。

反相色譜柱鍵合相主要包括：C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。對于以上反相色譜柱，我們在使用及維護(hù)的時候可以按照同樣的方式：

1、在條件允許情況下，在使用前需要對新色譜柱按照說明書方法進(jìn)行柱效測試。以確保色譜柱的正常。

2、所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于60℃。

3、樣品

建議將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物，使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑（例如，流動相為水，樣品溶劑為甲醇），為達(dá)到較好峰形，需要降低進(jìn)樣量（以250x4.6mm規(guī)格為例，小于10μL）。

4、流動相

所有流動相，特別是含有緩沖鹽的流動相，建議當(dāng)日實驗當(dāng)日配制；如果使用了前日配制的流動相，請確保流動相pH值沒有變化，并確保流動相沒有長菌。 流動相的pH值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內(nèi)使用。請盡量避免在常規(guī)流動相中使用很高比例的水（>95%）作為流動相，可能會造成保留時間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。如果使用高比例水或者*水相為流動相，建議使用親水柱，例如Hypersil GOLD aQ、Syncronis aQ、AcclaimPolar Advantage Ⅱ等色譜柱。

5、色譜柱平衡

在進(jìn)行分析之前，請使用至少20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達(dá)到平衡。

色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算：

V=0.68πr2

V為色譜柱柱體積（mL），r為色譜柱內(nèi)徑（cm），L為色譜柱長度（cm）。

6、色譜柱保護(hù)

對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護(hù)柱，如果可能，使用SPE小柱對樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。

7、色譜柱清洗

在儲存色譜柱之前，請使用至少20倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱（去除緩沖鹽），再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱（去除強(qiáng)保留成分，反相色譜通常使用甲醇或乙腈），然后使用合適的溶劑儲存色譜柱。

8、 色譜柱保存

反相色譜柱，保存溶劑通常是含至少30% 有機(jī)相的水溶液，也可在常規(guī)清洗后直接保存在有機(jī)相中。

如果需要長時間儲藏，則需要使用較高比例的有機(jī)相（有機(jī)相比例至少大于50%）