操作Hamilton 陽離子交換柱純化蛋白常見問題

Hamilton 陽離子交換柱離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團(活性基團)對各種離子的親和力不一樣人達到分離的目的的一種分離技術(shù)。離子交換劑是含有若干活性基團的不溶性物質(zhì)，即在不溶性母體上引入若干可解離基團而成，根據(jù)引入解離基團的不同，可以分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。各種離子對離子交換劑的親和力各不相同，親和力隨離子的價數(shù)與原子序數(shù)增加而增加，而隨離子水化膜半徑的增加而降低。對具體離子交換純化，需要主要離子交換劑的選擇和處理。洗脫不同蛋白的zui恰當?shù)碾x子強度液不一定一樣，通常采用濃度梯度和PH梯度相結(jié)合的方式洗脫，純化不同的蛋白先摸一摸洗脫液的離子濃度和PH值，其具體的離子濃度范圍可以很大，0.01mol/l到1mol/l，甚至3.0mol/l，PH值的范圍液很廣。

Hamilton 陽離子交換柱因為蛋白是通過靜電引力可逆的結(jié)合在離子交換樹脂上，要使蛋白與離子交換樹脂之間離子鍵打開，zui常用的方法就是加大反荷離子的濃度。不同反荷離子與樹脂親和力是不同的，其強弱關(guān)系為： 陽性競爭離子：Ag+》CS+>K+>NH4+>Na+>H+>Li+ 陰性競爭離子：I->NO3->(PO4)3->CN->HSO3->Mg2+>HCO3->HCOO->CH3COO->OH->F- 如果某種離子溶液洗脫效果不好，可用另一種親和力強的離子代替。

離子交換柱屬于弱離子交換劑，只有在一定的pH值范圍內(nèi)，才能有離子交換能力。